文章分類(lèi)
首先我們需要區分原代細胞和細胞系的概念：
原代細胞(primary cell)是指從機體的組織(如人組織、小鼠組織、兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細胞并在體外進(jìn)行模擬機體培養的細胞。
細胞系(cell line)是原代細胞經(jīng)首次傳代成功后即為細胞系。其中能夠連續傳代的細胞叫做連續細胞系或無(wú)限細胞系，不能連續培養的稱(chēng)為有限細胞系。人類(lèi)腫瘤細胞，在體外培養半年以上，生長(cháng)穩定，并連續傳代的即可稱(chēng)為連續性株或系。
原代細胞培養之組織取材
原代細胞最接近和最能反映體內生長(cháng)特性，適宜用于藥物敏感性試驗、細胞分化等實(shí)驗研究。
部位 | 方法 |
皮膚和黏膜 | 主要取皮片，面積一般2-4cm2 |
內臟和實(shí)體瘤 | ? 無(wú)菌環(huán)境； ? 熟悉所需組織的類(lèi)型和部位； ? 要避開(kāi)破潰、壞死、液化部分，以防污染、盡量去除混雜的結締組織。 |
血液細胞 | ? 一般多抽取靜脈外周血、或從淋巴組織中分離細胞； ? 取材時(shí)應注意抗凝。 |
骨髓、羊水、胸/腹水細胞 | 嚴格無(wú)菌、注意抗凝、還要盡快分離培養、離心后，用無(wú)鈣、鎂PBS洗兩次，再用培養液洗一次后即可培養，不宜低溫存放。 |
動(dòng)物組織取材-鼠胚組織 | ? 用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動(dòng)物； ? 將其浸泡在含75%酒精的燒杯中，5分鐘后取出動(dòng)物； ? 在消毒過(guò)得木板上可用無(wú)菌的圖釘固定四肢，切開(kāi)皮膚； ? 用無(wú)菌操作法解剖取胚。 |
動(dòng)物組織取材-幼鼠胚腎/肺 | ? 幼鼠采用上述方法處死消毒后； ? 腹部朝上固定在木板上，先切開(kāi)游離毛皮并拉開(kāi)至兩側； ? 采用無(wú)菌法打開(kāi)胸腔取肺，或從背部打開(kāi)腹腔取腎。 |
原代細胞的培養方法
組織塊培養法：
將剪成的小組織團塊接種于培養瓶（或皿）中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著(zhù)于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長(cháng)。
消化培養法：
該方法是源于消化分散法，將妨礙細胞生長(cháng)的細胞間質(zhì)（包括基質(zhì)、纖維等）去除，使細胞分散形成細胞懸液，然后分瓶培養。
懸浮細胞培養法：
對于懸浮生長(cháng)的細胞，如淋巴細胞、骨髓細胞、和免疫細胞等無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養。
器官培養：
從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養，其特性仍保持原有器官細胞的組織結構和聯(lián)系、并能存活。
注意事項：
1. 培養液和培養物的比例：一定濃度的培養物僅能支持一定數量的細胞生長(cháng)，不能盲目增加每單位體積的細胞濃度。
2. pH：初培養pH應為7.4，培養過(guò)程中應不低于7.0。
3. 培養瓶?jì)鹊目臻g：一般培養瓶?jì)扰囵B液與液面上的空間體積之比為1:10。
細胞系培養
細胞系常見(jiàn)生長(cháng)方式分為貼壁細胞和懸浮細胞
貼壁細胞 | 懸浮細胞 |
適合包括原代細胞在內的大多數細胞類(lèi)型。 | 適用于已適應懸浮培養的細胞和其他一些無(wú)粘附性的細胞。 |
需要定期傳代，但易于在倒置顯微鏡下進(jìn)行目視檢驗。 | 較易傳代，但需要每天進(jìn)行細胞計數和存活率測定，以遵循生長(cháng)方式;可將培養物稀釋以刺激生長(cháng)。 |
采用酶法或機械方法解離細胞。 | 無(wú)需通過(guò)酶法或機械方法解離細胞 |
細胞生長(cháng)受到表面積限制，從而可能限制細胞產(chǎn)量。 | 細胞生長(cháng)受到培養基中細胞濃度的限制，易于擴大規模培養 |
需要使用經(jīng)過(guò)組織培養處理的容器。 | 可在未經(jīng)組織培養處理的培養容器中進(jìn)行培養，但需要攪動(dòng)以便進(jìn)行充分的氣體交換 |
可連續收獲產(chǎn)物，用于細胞學(xué)研究等多種研究應用 | 可批量收獲產(chǎn)物，用于批量生產(chǎn)等多種研究應用 |
懸浮細胞傳代步驟
直接傳代法
1、待懸浮細胞長(cháng)滿(mǎn)至80%～90%（細胞懸液變黃），即可傳代；
2、用吸管吸棄細胞懸液 1 /2～1 / 3；
3、加入適量的新鮮培養基，繼續培養。
離心傳代法（在發(fā)現有細胞碎片的情況下）
1、將細胞懸液轉移到離心管內；
2、150 g 離心 5 min，棄去上層清液；
3、使用新鮮的培養基重懸細胞；吸管吸取適量細胞懸液，裝入新的培養瓶， 再加入適量的新鮮培養基，繼續培養。
貼壁細胞傳代步驟
清洗—消化—終止—標記
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